一、適用范圍
熒光探針法PCR試劑盒主要用于DNA分子的擴(kuò)增和檢測(cè),適用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、環(huán)保、食品安全等領(lǐng)域的基因檢測(cè)和研究。
二、試劑盒組分
本試劑盒包括:TaqDNAPolymerase、核酸引物混合液、熒光探針、混合實(shí)時(shí)PCRbuffer、雜交探針引物等多種成分。
三、試劑盒儲(chǔ)存條件
試劑盒應(yīng)存放于4℃環(huán)境中,不可凍結(jié),避免光照和日曬。
四、操作步驟
1、從樣本中提取DNA并加入PCR反應(yīng)管;
2、加入試劑盒中的TaqDNAPolymerase,核酸引物混合液和熒光探針;
3、加入混合實(shí)時(shí)PCRbuffer并充分混合;
4、進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè);
5、數(shù)據(jù)分析。
五、注意事項(xiàng)
1、試劑盒使用前應(yīng)充分搖勻;
2、反應(yīng)體系中不能有任何雜質(zhì);
3、PCR擴(kuò)增過程中應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時(shí)間,確保擴(kuò)增效果;
4、在檢測(cè)結(jié)果中,若目標(biāo)物對(duì)應(yīng)熒光探針的熒光值高于負(fù)對(duì)照熒光值,則可認(rèn)為該樣本中存在目標(biāo)物。
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋
若PCR擴(kuò)增后,熒光信號(hào)強(qiáng)度大于背景噪聲,則說明目標(biāo)物存在,反之則說明不存在。根據(jù)樣品的熒光信號(hào),可以通過計(jì)算閾值來判斷目標(biāo)物的數(shù)量。
七、質(zhì)量控制措施
為確保試劑盒質(zhì)量,本試劑盒的生產(chǎn)過程中進(jìn)行了多項(xiàng)質(zhì)量控制措施。例如在成分篩選、產(chǎn)品生產(chǎn)和包裝過程中不斷監(jiān)測(cè),確保每一批次的產(chǎn)品品質(zhì)穩(wěn)定可靠。同時(shí),每批產(chǎn)品在發(fā)貨前還會(huì)進(jìn)行校準(zhǔn)和功能測(cè)試,確保滿足客戶需求。
八、檢測(cè)限定及注意事項(xiàng)
為確保檢測(cè)準(zhǔn)確度,建議在每次檢測(cè)前使用模板對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行質(zhì)控。另外,在樣品處理、試劑配置、反應(yīng)條件控制等步驟中均需注意無菌操作,盡可能排除外源性污染。