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產(chǎn)品名稱:

牛冠狀病毒(BCV)熒光PCR核酸檢測試劑盒

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-07-05
牛冠狀病毒(BCV)熒光PCR核酸檢測試劑盒適用于檢測的犢牛的腸粘膜、腸系膜淋巴結組織、排泄物等標本中牛冠狀病毒 RNA,適用于牛冠狀病毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。
本試劑盒用一對牛冠狀病毒特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對牛冠狀病毒 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

產(chǎn)品概述

牛冠狀病毒(BCV)熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:牛冠狀病毒(BCV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name :Diagnostic Kit for Bovine Coronavirus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測的犢牛的腸粘膜、腸系膜淋巴結組織、排泄物等標本中牛

冠狀病毒 RNA,適用于牛冠狀病毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對牛冠狀病毒特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法

熒光 RT-PCR 技術對牛冠狀病毒 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染

者的病原學診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μl×1 管

BCV 反應液 1.0ml×1 管

BCV 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次,

有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

病死犢牛,取腸粘膜、腸系膜淋巴結組織;待檢活牛,取排泄物,放入 1mL50%

甘油生理鹽水中。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標

本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術剪剪碎混勻后取 0.05g 于

研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管

中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL 滅菌離心管中;排泄物:取 0.05g

于 1.5mL 滅菌離心管中,加入 1mL 生理鹽水渦旋振蕩,8000rpm 離心 2min,取上

清液 100uL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取

法),請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑 BCV 反應液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應的反

應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi);

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇:

檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置:

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲

線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

5.2結果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

7. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;

以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率

為 100%。

低檢測限:5.0×102copies/ml。

精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

 

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