熒光探針可以檢測(cè)到非常微小的PCR產(chǎn)物,因此具有高靈敏度,是自然界中一些微生物、病毒和癌癥等疾病診斷的理想技術(shù)。熒光探針可以特異性地檢測(cè)目標(biāo)序列,檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確,可克服其他傳統(tǒng)PCR技術(shù)的特異性問(wèn)題。志賀氏菌(SH)熒光探針?lè)≒CR試劑盒目前已實(shí)現(xiàn)PCR自動(dòng)化分析,可節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間和人力成本,提高實(shí)驗(yàn)效率。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次,有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
1.1 結(jié)果判斷
陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0,且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線(xiàn)。
可疑:檢測(cè)通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線(xiàn)的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線(xiàn)者為陽(yáng)性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線(xiàn)。
2. 檢測(cè)方法的局限性
a. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
b. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;
c. 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;
d. 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
e. 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
f. 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;
g. 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
3. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無(wú)明顯擴(kuò)增曲線(xiàn)或無(wú) Ct 值顯示;
陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線(xiàn)有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
1.1 DNA 提取
1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液), 100℃恒溫處理 10min,13,000 rpm 離心 5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
志賀氏菌(SH)熒光探針?lè)≒CR試劑盒???相關(guān)產(chǎn)品:
1311禽結(jié)合桿菌(ATB)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T |
1211鴨型乙型肝炎病毒(DHBV)試劑盒(PCR-熒光探針48T |
1111雞傳染性貧血病病毒(CIAV)試劑盒(PCR-熒光探48T |
1013禽腺病毒(AADV)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T |
1011雞減蛋綜合征病毒(EDSV)試劑盒(PCR-熒光探針48T |
0711副雞嗜血桿菌(HPG)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T |
0611鴨瘟病毒(DPV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T |
0111雞滑液囊支原體(MS)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T |
0211雞馬立克病毒(MDV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T |
0411雞毒支原體(MG)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T |